在HPLC(高效液相色譜)操作中,兩種典型的錯誤操作包括:
1. **對流動相進(jìn)行不必要的過濾**:通常,經(jīng)過凈化系統(tǒng)處理得到的HPLC級溶劑和水已經(jīng)足夠干凈。如果再次進(jìn)行額外的過濾,可能會引入不必要的化學(xué)污染。然而,當(dāng)使用離子對試劑、低純度緩沖劑或高鹽含量的流動相時,或者當(dāng)水源質(zhì)量不佳導(dǎo)致凈化系統(tǒng)流出的水不夠干凈時,仍需要對流動相進(jìn)行過濾。
2. **使用不適當(dāng)?shù)纳V柱**:一種常見的錯誤是選擇粒徑為5μm的顆粒填充的色譜柱,盡管多年來這種規(guī)格的色譜柱一直作為標(biāo)準(zhǔn)使用。實(shí)際上,3μm粒徑顆粒填裝的色譜柱(150mm×4.6mm)具有更好的分離效果及更短的分析時間。然而,需要注意的是,3μm粒徑顆粒填裝的色譜柱的進(jìn)口孔隙更小,更容易被“臟”的樣品堵塞。另外,盡管4.6mm內(nèi)徑的色譜柱長期以來一直作為HPLC分析柱的“標(biāo)準(zhǔn)”,但在努力減少溶劑消耗和節(jié)約樣品的目標(biāo)下,許多實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)開始轉(zhuǎn)向使用3.0mm內(nèi)徑的色譜柱。
為了避免這些錯誤,建議用戶在使用HPLC時仔細(xì)閱讀并遵循相關(guān)儀器和試劑的說明書,并根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件和需求進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整和優(yōu)化。同時,定期對儀器進(jìn)行維護(hù)和保養(yǎng),確保其在最佳狀態(tài)下運(yùn)行。