γ-氨基丁酸

γ-氨基丁酸（又稱4-氨基丁酸，GABA）是一種天然存在的非蛋白質(zhì)功能性氨基酸，參與人體中多種代謝活動(dòng)，具有很多重要的生理活性功能。GABA能抑制交感神經(jīng)系統(tǒng)的興奮，有助于改善睡眠、鎮(zhèn)靜和防焦慮。GABA在胰島β細(xì)胞內(nèi)可增加胰島素分泌，作用于胰島α細(xì)胞可抑制胰高血糖素分泌，在預(yù)防和治療糖尿病上有潛在應(yīng)用。GABA可以促進(jìn)腦細(xì)胞的新陳代謝，幫助腦細(xì)胞恢復(fù)功能，增強(qiáng)長期記憶。此外，GABA還具有抗高血壓、抗氧化、緩解壓力、抗腫瘤等健康益處。

由于其健康屬性，GABA的檢測受到學(xué)術(shù)界的廣泛關(guān)注?，F(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道GABA的檢測方法主要有液相色譜法、Berthelot比色法、氣相色譜-質(zhì)譜法等。液相色譜法一般使用紫外-可見光或熒光檢測器，氨基酸需要在柱前或柱后進(jìn)行衍生反應(yīng)生成有色物質(zhì)，是目前氨基酸分析中應(yīng)用最多的方法。今天菲羅門就γ-氨基丁酸的檢測知識為大家詳細(xì)的說明一下。

一、衍生法方法：根據(jù)國標(biāo)QB/T 5633.7-2022 第七部分：γ-氨基丁酸，紫外檢測法

原理：氨基酸與2,4-二硝基氟苯進(jìn)行定量衍生反應(yīng)，生成在360nm處有較強(qiáng)在外吸收的穩(wěn)定衍生物。

色譜柱：菲羅門核殼柱FastCore C18-AQ 5u 250*4.6mm（貨號：FSG-5AC18-EONU）

流動(dòng)相：A相：稱取4.1g乙酸鈉，加純化水使其溶解，加入60uL冰乙酸，定容到1000mL，抽濾

B相：純乙腈    

梯度洗脫程序見右表                                        

流速：0.8 mL/min           

檢測波長：360nm

柱溫：（35±5）℃                          

進(jìn)樣量：10ul

圖一：FastCore C18-AQ 5u 250*4.6mm檢測結(jié)果圖

注明：8.094minγ-氨基丁酸，客戶評價(jià)：這款色譜柱，是核殼色譜柱，柱效高于常規(guī)硅膠色譜柱，峰形對稱，同時(shí)減少檢測時(shí)間增加檢測效率。

近年來，越來越多研究人員希望采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）測定食品中GABA。LC-MS/MS具有操作簡單快捷、定性定量準(zhǔn)確、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，所以菲羅門開發(fā)適用于質(zhì)譜條件的檢測方法。

1. 不衍生直接檢測法，適用于ELSD，CAD, LC-MS

    

   色譜柱 1：Comixsil RP-100 5 μm 100×3.0 mm（貨號：FMD-100R5-YONU）

   流動(dòng)相 1：ACN:水：20mM (pH=3)甲酸銨=10：80：10

1. 氯離子 2. 瓜氨酸 3. 4-氨基丁酸（GABA） 4. 鳥氨酸 5. 多巴胺 6. 精氨酸

    

    

    

   色譜柱 2：Comixsil HCS 3 μm 100×3.0 mm（貨號：FMD-HCS3-YONU）

   流動(dòng)相 2：乙腈：200 mM 甲酸銨 (pH 3)=72:28

2. 氯離子 2. 瓜氨酸 3. 4-氨基丁酸（GABA） 4. 鳥氨酸 5. 多巴胺 6. 精氨酸

    

    

    

    

   色譜柱3：Comixsil HAC 3u 100*3.0mm (P/N: FMD-HAC3-YONU)

   流動(dòng)相3：A：乙腈 B：100mM 甲酸銨 pH 3 C：水 D：1% 甲酸

    

    

    

    

    

   食品中GABA可能的生成途徑有兩條：第一條是谷氨酸脫羧酶及其輔助因子磷酸吡哆醛催化谷氨酸或其鹽脫羧合成，稱為GABA支路；第二條途徑是由二胺氧化酶和多胺氧化酶降解多胺（腐胺、精胺、亞精胺）形成多胺中間產(chǎn)物，多胺中間產(chǎn)物在脫氫酶的催化下形成GABA。

    

    

   三、γ-氨基丁酸生成途徑中里面涉及的谷氨酸和多胺化合物相關(guān)案例。

1. 多胺化合物（腐胺、精胺、亞精胺），同時(shí)適用于質(zhì)譜條件。

   色譜柱：Titank F5 5μm 150×4.6mm（貨號：FMF-5565-EONU）

   流動(dòng)相：甲醇/水（30/70），含 10mM 甲酸

   流速：1.0ml/min

   進(jìn)樣體積：1μL（25μg/mL）

   檢測：CAD

   溫度：25℃

    

    

    

2. 谷氨酸

   色譜柱：Comixsil HCS 5μ 250*4.6mm（貨號：FMG-HCS5-EONU )

   流動(dòng)相：乙腈：50mM 磷酸氫二銨（pH 6.0）=60:40

    

    

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