在LC(液相色譜)系統(tǒng)中,“體積”是一個(gè)重要的概念,它涉及多個(gè)方面,包括但不限于柱體積、死體積、駐留體積和延遲體積等。以下是需要知道的LC系統(tǒng)“體積”知識:
### 1. 柱體積(Column Volume)
* **定義**:柱體積是指液相色譜柱內(nèi)填料的總體積,它決定了色譜柱的容量和分離能力。
* **計(jì)算方法**:通??梢酝ㄟ^公式V=π×r×r×h來計(jì)算,其中r為色譜柱的半徑,h為色譜柱的長度(即圓柱體的高)。但需要注意的是,對于某些品牌的色譜柱,如安捷倫,其柱體積一般是色譜柱的柱管體積乘以65%或60%來計(jì)算,這取決于填料的緊密堆積程度和實(shí)際使用情況。
* **重要性**:柱體積的大小直接影響色譜柱的分離效率和樣品負(fù)載量。較大的柱體積可以提供更好的分離效果和更高的樣品負(fù)載量,但也會增加分析時(shí)間和溶劑消耗。
### 2. 死體積(Dead Volume, V0)
* **定義**:死體積是指從進(jìn)樣點(diǎn)到檢測器之間,不參與色譜分離過程的體積。它主要包括進(jìn)樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙(被流動相占據(jù),Vm)、柱出口管路體積和檢測器流動池體積。
* **重要性**:死體積過大會導(dǎo)致色譜峰展寬和分離度降低,從而影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,在液相色譜系統(tǒng)設(shè)計(jì)中,應(yīng)盡量減少死體積。
* **測定方法**:系統(tǒng)死體積一般通過進(jìn)樣基本不保留的小分子(如尿嘧啶、丙酮和硫脲)來測定。死時(shí)間(即樣品通過死體積所需的時(shí)間)與死體積相關(guān),可以用死體積除以流速來測定。
### 3. 駐留體積(Hold-Up Volume)
* **定義**:駐留體積是指溶劑首次混合點(diǎn)(通常在液相色譜儀的混合腔內(nèi)或比例閥中)與液相色譜柱頭之間的體積。
* **重要性**:在梯度洗脫或等度洗脫的溶劑組成改變時(shí),駐留體積對于使色譜柱在盡可能短的時(shí)間內(nèi)完成流動相組成的變化非常重要。它確保了樣品和梯度能夠同時(shí)到達(dá)柱進(jìn)口,從而提高了分析的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。
### 4. 延遲體積(Delay Volume)
* **定義**:延遲體積與駐留體積在概念上相似,都涉及到溶劑混合點(diǎn)到色譜柱頭的體積。但延遲體積更側(cè)重于描述在溶劑組成變化時(shí),系統(tǒng)需要一段時(shí)間來穩(wěn)定流動相組成的現(xiàn)象。
* **重要性**:在梯度洗脫過程中,延遲體積的大小會影響色譜峰的形狀和分離度。較大的延遲體積可能導(dǎo)致色譜峰展寬和分離度降低。
綜上所述,LC系統(tǒng)中的“體積”知識涉及多個(gè)方面,包括柱體積、死體積、駐留體積和延遲體積等。了解這些概念及其重要性對于優(yōu)化液相色譜分析條件、提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性具有重要意義。