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蜂蜜中四環(huán)素類藥物殘留檢測的固相萃取方法
（PolyClean X-HLB）

一、實驗目的

本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法，HPLC作為分析方法，檢測蜂蜜樣品中四環(huán)素類抗生素的殘留水平。該方法操作簡便，可簡化樣品前處理過程，減少有機溶劑的使用。二、實驗目標物

土霉素(CAS:79-57-2)、四環(huán)素（CAS:60-54-8）。

三、應用范圍

本方法適用于蜂蜜中四環(huán)素類的固相萃取及HPLC檢測與確證。四、參考標準

《GB/T 21317-2007食品安全國家標準 動物源性食品中四環(huán)素類藥物殘留量檢測方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法與高效液相色譜法》

五、實驗材料

NuAnalyticalPolyCleanX-HLB固相萃取柱60mg/3mL。六、實驗方法

1、 樣品待測溶液制備

稱取混勻蜂蜜試樣5 g(精確到0.01 g)，置于50 mL 離心管中， 用0.1 mol/L

EDTA-Mcllvaine緩沖液溶解并定容至50mL，漩渦混合1min，冰水浴超聲10min，轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，冷卻至0 ℃～4 ℃，5000r/min離心10min（溫度低于15 ℃），用中速濾紙過濾待凈化。

2、活化

依次用5 mL甲醇和5 mL水活化。

3、上樣和洗脫

準確吸取10 mL備用液以1滴/秒的速度過HLB固相萃取柱，待樣液全部流出后，依次用5 mL水和5 mL甲醇-水(5:95, v/v)淋洗，棄去全部流出液。2.0 kPa以下減壓抽干5 min，最后用10 mL甲醇-乙酸乙酯溶液(1:9, v/v)洗脫，收集洗脫液。

4、重新溶解

洗脫液于40℃氮氣吹干，加10 mmol/L三氟乙酸水溶液1.0 mL溶解殘余物，濾膜過濾，供HPLC測定。

5、HPLC條件

色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)

檢測器：UV@350 nm

流動相：A:   乙腈    B:10mmol/L三氟乙酸水溶液

柱溫：室溫    流速：1.0mL/min           進樣量：20μL