本研究利用固相萃取法作為樣品前處理方法，HPLC 法作為檢測手段。該方法操作方便， 可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

氫化可的松(CAS:50-23-7)

三、應(yīng)用范圍

本方法適用于牛奶中氫化可的松的檢測及確證。

四、實(shí)驗(yàn)材料

NuAnalytical SuperClean Silica 固相萃取柱 500 mg/6 mL。

1、 樣品待測溶液制

稱取牛奶試料 5 g 于 50 mL 離心管中，加 30 mL 乙酸乙酯，均質(zhì) 1 min，350 r/min 搖床振動(dòng) 20 min，4200 r/min 離心 10 min，移取乙酸乙酯層。殘?jiān)屑右宜嵋阴?25 mL，均質(zhì) 1 min， 350 r/min 搖床振動(dòng) 20 min，4200 r/min 離心 10 min，移取乙酸乙酯層。合并兩次提取液，40  ℃旋轉(zhuǎn)至近干，加乙酸乙酯 1 mL 和正己烷 5 mL，溶解殘?jiān)齼艋?/span>

2、活化

用 6  mL 正己烷活化Silica 固相萃取柱。

3、上樣和洗脫

取待測液，通過 Silica 固相萃取小柱富集，棄去流出液。用 6 mL 正己烷淋洗固相萃取柱，真空抽干 5 min，棄去流出液。用 6 mL 正己烷-丙酮(6:4, v/v)洗脫萃取柱，收集洗脫液。

4、重新溶解

洗脫液于 40  ℃氮?dú)獯蹈桑?20%乙腈水溶液 2.0 mL 溶解殘余物，過 0.22 μm 濾膜，供HPLC 測定。

5、HPLC 條件

色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)

檢測器：UV@254 nm

流動(dòng)相：A：乙腈    B：0.1%甲酸水溶液

柱溫：室溫         

流速：1.0 mL/min             

進(jìn)樣量：20 μL

洗脫方式：梯度洗脫，洗脫程序如下：

 六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

 1、 牛奶中氫化可的松的 1mg/kg 添加回收結(jié)果

2、添加水平為 1mg/kg 牛奶中氫化可的松檢測色譜圖

 圖 1    添加水平為 1mg/kg 牛奶中氫化可的松檢測色譜圖