相同的質(zhì)量控制,可以確保不同批次色譜柱的高重現(xiàn)性,也可以保證您更容易地在UHPLC和HPLC方法之間進(jìn)行轉(zhuǎn)換,或需要分離和純化目標(biāo)化合物時(shí)放大到制備應(yīng)用上。
柱效當(dāng)然會(huì)改變,但可以預(yù)料的是,譜帶間距(選擇性)將相同。
圖14闡明了當(dāng)使用相同的ACE鍵合相但不同粒徑填充的色譜柱進(jìn)行操作時(shí),可以預(yù)見(jiàn)到分析物一致的譜帶間距類(lèi)型(選擇性)。
圖 14:將ACE固定相從UHPLC(2μm)擴(kuò)展到HPLC(3μm和5μm)再至制備型HPLC(10μm)時(shí),選擇性得到了保留與保證。
條件
流動(dòng)相:35:65 MeCN/0.1%TFA(溶于水中)
溫度:22 ℃
波長(zhǎng):254 nm
分析物
1. 尿嘧啶
2. 4-羥基苯甲酸
3. 乙酰水楊酸
4. 苯甲酸
5. 2-羥基苯甲酸
6. 對(duì)羥基苯甲酸乙酯
試驗(yàn)樣品的這些色譜圖在填充有相同的鍵合相但不同粒徑的色譜柱上以相同的流動(dòng)相條件運(yùn)行,結(jié)果闡明分離從UHPLC擴(kuò)展到HPLC再到制備型HPLC的容易程度。
當(dāng)使用ACE Excel UHPLC色譜柱進(jìn)行快速方法開(kāi)發(fā),且該方法必須可轉(zhuǎn)移到HPLC時(shí),易擴(kuò)展性則顯得特別有價(jià)值。
圖 15:ACE固定相可以提供相同的選擇性,無(wú)論它們是UHPLC、HPLC還是制備型HPLC色譜柱
條件
色譜柱:2.1 x 50 mm
流動(dòng)相:1.4分鐘內(nèi)從30% B至90% B
A = 20mM甲酸銨+ 0.1%甲酸
B =乙腈+ 0.1%甲酸
梯度:在30%B時(shí)持續(xù)0.30分鐘,在1.10分鐘內(nèi)從30至90%B,在90%B時(shí)持續(xù)0.40分鐘
流速:0.5 mL/min
柱溫:30oC
檢測(cè):AB Sciex Triple Quad(TM)5500 MS,以ESI(+)模式運(yùn)行
儀器:島津Prominence UFLC系統(tǒng)
分析物
1. 甲苯咪唑
2. 普羅替林
3. 阿米替林
4. 洛哌丁胺
試驗(yàn)樣品的這些色譜圖在ACE Excel C18 2μmUHPLC色譜柱、ACE C18 3μmHPLC色譜柱和ACE C185μm色譜柱上以相同的流動(dòng)相條件運(yùn)行,結(jié)果闡明ACE固定相的選擇性一致,無(wú)論填充粒徑如何。
這使得從UHPLC到HPLC或HPLC再到UHPLC的方法轉(zhuǎn)移更加容易。同時(shí)也使得從分析型應(yīng)用擴(kuò)展到制備型應(yīng)用更加容易。